金黄色葡萄球菌基因组DNA基本信息
| 培养基 | 营养肉汁培养基（NA/NB）：牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，琼脂 20.0g(液体培养基不含)，蒸馏水 1.0L，pH 7.0。121℃，15min灭菌。[注]培养芽孢杆菌时加入5mgMnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。 |
| 传代方法 | 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签； 1.取细菌培养液1-5ml，10,000rpm(11,500×g)离心1min，尽量吸净上清； 2.向菌体沉淀中加入200μL缓冲液GA，振荡至菌体彻底悬浮。注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶溶液进行破壁处理，具体方法为：加入110μL缓冲液（20mM Tris,pH8.0；2mM Na2-EDTA；1.2%Triton），和70μL溶菌酶溶液（50mg/mL，客户自备，目录号：RT401），37℃处理30min以上。如果需要去除RNA，可加入4μL RNase A（100mg/mL）溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15sec，室温放置5min； 3.向管中加入20μL Proteinase K溶液，混匀； 4.加入220μL缓冲液GB，振荡15sec，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯； 5.加220μL无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠； 6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中； 7.向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中； 8.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中； 9.重复操作步骤8； 10.将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm(13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验； 11.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min，12,000rpm(13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2min，12,000rpm(13,400×g)离心2min； |
| 生长条件 | 37℃，好氧，18-24h。 |
| 生长特性 | G+球菌，单个、成对、不规则堆状排列。不生芽胞。鸟氨酸脱羧酶阴性，发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖产酸不产气，发酵甘露醇。甲基红反应阳性，伏-普实验弱阳性。血平板菌落周围形成透明的溶血环。产金黄色色素。兼性厌氧，最适pH7.0-7.5。 |
| 存储条件 | 2-8℃ |
| 安全等级 | 2 |
| 形态 | 圆形，边缘整齐，不透明，颜色较浅，浅色，中间凸起，表面光滑，表面明亮，质地湿润，易挑起，不产色素，G＋（蓝紫色），球菌，纯度：纯 |
| 应用领域 | 研究；分析检测。检定抗生素，《消毒技术规范》中医疗器械灭菌效果检测用菌，《GB 4789.2-2010菌落总数测定》阳性对照菌株，2015版中国药典质控菌株。无菌测试；新霉素、cefactor、阿米卡星、卡那霉素、头孢西丁、头孢唑啉、萘夫西林,新青二、万古霉素、林可霉素、青霉素、妥布霉素、新霉素b、螺旋霉素、短杆菌肽、头孢噻肟、头孢氨苄、先锋霉素、光神霉素、庆大霉素、强力霉素、甲氧西林、头孢羟唑、头孢菌素、氯唑西林、环丝氨酸、红霉素、四环素、甲烯土霉素头孢菌素、双氯青霉素、地美环素、土霉素、土霉素罗利环素、金霉素的测定；卡那霉素、克林霉素、链霉素和四环素的药敏试验。GB 4789.2-2016菌落总数测定。 |
| 共享方式 | 公益性共享 |
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