黑曲霉基因组DNA基本信息
培养基 | 综合PDA琼脂(英文名:CPDA):马铃薯煮液 1.0L,葡萄糖 20.0g,KH2PO4 3.0g,MgSO4·7H2O 1.5g,维生素B1 微量,琼脂 20.0g,pH 6.0±0.2。121℃,15min灭菌。马铃薯煮液:称取200g去皮的马铃薯块,沸水煮30min,收集滤液定容至1.0L。 |
传代方法 | 使用前请先在去蛋白液RD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上标签; 1.取新鲜菌丝加入液氮充分研磨; 2.向研磨好的粉末中迅速加入400μL缓冲液GPS和10μL RNase A(10mg/mL),迅速涡旋混匀后,将离心管放在65℃水浴15min,水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。注意:若裂解后溶液粘稠,可以适量加大GPS使用量,同时在步骤3中增加缓冲液GPA的使用量,最终GPS和GPA的体积比为4:1; 3.加入100μL缓冲液GPA,涡旋振荡1min,12,000rpm(13,400×g)离心5min,转移上清至过滤柱CS中(过滤柱CS放在收集管中),然后12,000rpm(13,400×g)离心1min,转移滤液至新的离心管中。注意:若裂解后溶液粘稠,加入缓冲液GPA涡旋混匀后将离心管置于冰上静置5min,然后再离心; 4.加入等体积的无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀; 5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都转移到RNase-Free吸附柱CR2中(吸附柱CR2放在收集管中),12,000rpm(13,400×g)离心1min,倒掉废液,RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中; 6.向RNase-Free吸附柱CR2中加入550μL去蛋白液RD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm(13,400×g)离心1min,倒掉废液,将RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中; 7.向RNase-Free吸附柱CR2中加入700μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm(13,400×g)离心1min,倒掉废液,将RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中; 8.重复步骤7; 9.将RNase-Free吸附柱CR2放回收集管中,12,000rpm(13,400×g)离心2min,弃收集管,然后将RNase-Free吸附柱CR2转移到新的离心管中,室温晾干5-10min。注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间,以免难以洗脱DNA; 10.在RNase-Free吸附柱CR2中加入50-100μL洗脱缓冲液TB,室温放置3-5min,12,000rpm(13,400×g)离心2min,将溶液收集到离心管中; |
生长条件 | 25-28℃,严格好氧,5-7d. |
生长特性 | 菌落白色丝状,产大量黑色孢子黑色,反面淡黄褐色,菌落表面平坦,有放射状沟纹,质地丝绒状,有少量无色渗出液。分生孢子头球型,直径50-80μm;孢梗茎直径10-15μm,壁平滑;顶囊球型,直径30-40μm,表面全面可育;产孢结构双层,梗基10-12×2-3μm;瓶梗6-8×2-3μm;分生孢子球型,直径3-4μm,壁粗糙。 |
存储条件 | 2-8℃ |
安全等级 | 1 |
应用领域 | 研究;分析检测。2015版中国药典质控菌株,《GB 4789.15-2010霉菌和酵母计数》阳性对照菌株。产孢子。2020版药典—“通则1100 生物检查法”供试菌株 药典用菌,培养基“灵敏度检查”供试菌株,“方法适用性试验”供试菌株 ,“计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验”供试菌株,微生物计数“培养基适用性检查和方法适用性试验”供试菌株,“培养基适用性检查、方法适用性试验、抑菌效力测定试验”供试菌株 GB 4789.15-2016霉菌和酵母计数 |
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