烟曲霉基因组DNA基本信息
培养基 | 麦芽汁琼脂(英文名:MA):麦芽提取物20.0g,葡萄糖20.0g,蛋白胨1.0g,琼脂20.0g,蒸馏水 1.0L,pH 自然。121℃,15min灭菌。 |
传代方法 | 使用前请先在去蛋白液RD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上标签; 1.取新鲜菌丝加入液氮充分研磨; 2.向研磨好的粉末中迅速加入400μL缓冲液GPS和10μL RNase A(10mg/mL),迅速涡旋混匀后,将离心管放在65℃水浴15min,水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。注意:若裂解后溶液粘稠,可以适量加大GPS使用量,同时在步骤3中增加缓冲液GPA的使用量,最终GPS和GPA的体积比为4:1; 3.加入100μL缓冲液GPA,涡旋振荡1min,12,000rpm(13,400×g)离心5min,转移上清至过滤柱CS中(过滤柱CS放在收集管中),然后12,000rpm(13,400×g)离心1min,转移滤液至新的离心管中。注意:若裂解后溶液粘稠,加入缓冲液GPA涡旋混匀后将离心管置于冰上静置5min,然后再离心; 4.加入等体积的无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀; 5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都转移到RNase-Free吸附柱CR2中(吸附柱CR2放在收集管中),12,000rpm(13,400×g)离心1min,倒掉废液,RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中; 6.向RNase-Free吸附柱CR2中加入550μL去蛋白液RD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm(13,400×g)离心1min,倒掉废液,将RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中; 7.向RNase-Free吸附柱CR2中加入700μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm(13,400×g)离心1min,倒掉废液,将RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中; 8.重复步骤7; 9.将RNase-Free吸附柱CR2放回收集管中,12,000rpm(13,400×g)离心2min,弃收集管,然后将RNase-Free吸附柱CR2转移到新的离心管中,室温晾干5-10min。注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间,以免难以洗脱DNA; 10.在RNase-Free吸附柱CR2中加入50-100μL洗脱缓冲液TB,室温放置3-5min,12,000rpm(13,400×g)离心2min,将溶液收集到离心管中; |
生长条件 | 28-30℃,好氧 |
存储条件 | 2-8℃ |
安全等级 | 1 |
共享方式 | 公益性共享 |